Analisis microbiológicos con ColiControl
La metodología enzimática basada en los sustratos ONPG (orto-nitrofenil-β-D-galactopiranósido) y MUG (4-metilumbeliferil-β-D-glucurónido) representa un avance tecnológico fundamental en la detección microbiológica de coliformes totales y Escherichia coli en muestras de agua, consolidándose como un estándar internacional para el control sanitario.
Fundamento y evolución histórica
Esta técnica se originó en los años 80 y 90 del siglo XX, cuando se comenzaron a utilizar sustratos cromogénicos y fluorogénicos para facilitar la identificación rápida y específica de bacterias mediante su actividad enzimática.
- ONPG es hidrolizado por la enzima β-galactosidasa presente en coliformes totales, generando un cambio visible en la muestra, de incolora a amarilla.
- MUG es atacado por la enzima β-glucuronidasa característica de E. coli, que al hidrolizarlo produce fluorescencia detectada bajo luz ultravioleta.
Este método se desarrolló inicialmente en laboratorios e instituciones académicas europeas, con importantes aportaciones de la Universidad de Barcelona y empresas especializadas en medios microbiológicos. Su aplicación fue revolucionaria al ofrecer una detección más rápida y confiable que los métodos tradicionales basados en cultivos y fermentación, muchos de los cuales podían requerir hasta 48 horas o más y presentaban mayores problemas de falsos positivos y negativos.
Procedimiento y ventajas técnicas
El análisis con ONPG/MUG se realiza incubando la muestra con estos sustratos, y evaluando:
- Un cambio de color amarillo indica la presencia de coliformes totales.
- La fluorescencia azul bajo luz UV señala la presencia específica de E. coli.
Las principales ventajas de esta metodología incluyen:
- Alta especificidad y sensibilidad: Solo los microorganismos que expresan las enzimas β-galactosidasa y β-glucuronidasa metabolizan ONPG y MUG respectivamente, reduciendo interferencias de otros microorganismos no coliformes.
- Rapidez: Resultados en 18 a 24 horas, acelerando el diagnóstico microbiológico en comparación con métodos convencionales.
- Simplicidad y claridad: La visualización directa del color y la fluorescencia elimina la necesidad de procedimientos adicionales de confirmación.
- Reducción de errores: El método minimiza falsos positivos y negativos mediante la inhibición de organismos no objetivos y la especificidad enzimática.
- Validación internacional: Está avalado por normas como la ISO 9308-2:2012, la norma y el método analítico 9223-3 del Estándar Método Versión 24, que garantizan su aplicación confiable en vigilancia de calidad de agua.
Impacto y aplicación actual
Con su formulación exclusiva el ColiControl pone a su alcance la metodología ONPG/MUG la cual se ha adoptado globalmente y permite realizar análisis tanto cualitativos (presencia/ausencia) como cuantitativos (número más probable, NMP), esenciales en el control sanitario de agua potable, aguas residuales y cuerpos superficiales. La facilidad de uso, rapidez y exactitud han facilitado que organismos reguladores y laboratorios de todo el mundo la consideren un estándar recomendable y confiable para la evaluación microbiológica del agua.
En suma, la incorporación de la biotecnología y la microbiología enzimática en estos métodos representa un salto significativo para la salud pública, mejorando la capacidad de monitoreo y respuesta ante la contaminación microbiana, contribuyendo a garantizar agua segura y saludable para la población.